高通量DNA打斷儀是二代測(cè)序文庫(kù)構(gòu)建中,用于將大片段基因組DNA批量剪切為目標(biāo)長(zhǎng)度小片段的自動(dòng)化設(shè)備,能實(shí)現(xiàn)多樣本平行處理,相比超聲破碎法更高效、均一性更好,是高通量測(cè)序?qū)嶒?yàn)室的核心設(shè)備。
高通量DNA打斷儀主要采用非接觸式聚焦超聲技術(shù)(AFA)來(lái)實(shí)現(xiàn)對(duì)DNA分子的“冷”剪切:
超聲空化效應(yīng):儀器通過(guò)高頻超聲波在液相中產(chǎn)生無(wú)數(shù)微小的氣泡(空化泡),這些氣泡瞬間崩潰時(shí)會(huì)產(chǎn)生大的局部剪切力,從而將溶液中的DNA分子隨機(jī)拉斷。
非接觸與封閉處理:樣本全程密封在獨(dú)立的離心管或孔板中,超聲波通過(guò)水浴介質(zhì)隔著管壁傳遞能量。這種設(shè)計(jì)避免了傳統(tǒng)探頭超聲帶來(lái)的金屬碎屑污染、氣溶膠交叉感染以及樣本損耗。
準(zhǔn)確的溫控系統(tǒng):打斷過(guò)程中產(chǎn)生的熱量易導(dǎo)致DNA變性降解。
相比手動(dòng)超聲破碎,高通量DNA打斷儀的優(yōu)勢(shì):
支持同時(shí)處理8/24/96個(gè)樣本,批量處理效率高,適配高通量測(cè)序多樣本建庫(kù)需求;
可準(zhǔn)確控制DNA片段長(zhǎng)度,能實(shí)現(xiàn)100bp-5kb不同范圍的片段化,滿足不同測(cè)序讀長(zhǎng)要求;
溫控準(zhǔn)確,一般帶循環(huán)冷卻系統(tǒng),避免超聲產(chǎn)熱導(dǎo)致DNA降解或修飾損傷;
自動(dòng)化程序控制,無(wú)需人工值守,重復(fù)性好,不同批次打斷結(jié)果一致性高。